Biokémia és más interdiszciplináris tudományok
-
#102
Csak, hogy pár szót azért mégis írjak a szakdolgozatról (most sem vagyok sokkal előbb az irodalommal):
Humán sejteket tenyésztek (HepG2 vonal, humán hepatokarcinóma, halhatatlan sejtek), amelyeket etídium-bromidos (EtBr) kezelésnek teszünk ki.
Az EtBr-ot DNS jelölő festékként használják (pl. gélen való előhívásra, vagy real-time PCR során), a bázisok közé interkalál és ekkor megnövekedik a fluoreszcenciája, így a kettős szálú DNS detektálható.
Viszont pont az interkalálódó tulajdonsága miatt mutagén is, főképp pontmutációkat okoz. Attardi írta le először, hogy megfelelő koncentrációban alkalmazva a mitokondriális DNS (mtDNS) kipucolható, mert annyi mutáció keletkezik rajta, míg a nukleáris DNS megmarad (a nukleáris DNS javító apparátusa jobb működése miatt).
Az így kialakult sejtvonalat hívják rho nullás (rho0)sejtvonalnak. A rho0-ás sejtek mitokondriumaiból hiányzik a mtDNS, de a mitokondriumok megmaradnak, bár elvesztik formájukat, ún. szellem mitokondriumok lesznek.
Érthetően azok a fehérjék sem lesznek jelen, amelyeket a mtDNS kódol, ezek mind az elektron transzport lánc (ETC) fehérjéi.
Az ETC hiányában a sejtek csak a glikolízisből nyerhetnek energiát, így voltaképp anaerobok lesznek és így is lehet kezelni őket, mint anaerobok.
A tézisem fő kérdése, hogy anaerob körülmények között, hogyan megy a mitokondriális oxidatív folding.
A foldingról elöljáróban annyit, hogy ez a naszcens fehérjék cisztein (Cys) szulfhidril (-SH) csoportjainak oxidációjáról van szó, amely révén kialakul a két Cys között egy diszulfid híf (-S-S-). Ebben a folyamatban szükség van egy elektron akceptorra, amely a szulfhidril oxidációjakor redukálódik, és a két elektront fogadja.
Aerob esetben ismert a folyamat: a mitokondriális belső membránjában, az intermembrán térbe néző (IMS) van egy fehérje, az Erv1, amely egy FADH2 prosztetikus csoportot tartalmazó szulfhidril oxidáz, katalizálja ezt a folyamatot, és az elektronokat az ETC-be juttatja!
Így jön elő a kérdés, hogy mindez hogyan történik abban az esetben, mikor az elektronok nem juthatnak az ETC-be O2 hiánya miatt, avagy anaerob körülmények között, ugyanis ismert, hogy ilyenkor is van mt. fehérje folding.
A témavezetőm szerint van egy alternatív elektron akceptor, és ha ez igaz, akkor majd ezzel a molekulával a foldingot fokozni tudjuk.
Ezt akarjuk kimérni :) QED :D